Посмертная диагностика гельминтозов
Посмертная диагностика гельминтозов осуществляется при вскрытии трупов и исследовании туш сельскохозяйственных животных и обнаружении гельминтов и характерных патологоанатомических изменений в органах и тканях. Некоторые гельминтозы (аскаридоз, фасциолез, диктиокаулез, метастронгилез и др.), возбудителями которых являются крупные гельминты, могут быть диагностированы при патологоанатомическом вскрытии.
Однако многие гельминтозы, вызванные мелкими паразитическими червями, можно точно диагностировать только путем гельминтологических вскрытий. Различают несколько модификаций гельминтологических вскрытий животных: 1) метод полных гельминтологических вскрытий животных по К. И. Скрябину - предусматривает обследование всех без исключения органов и тканей хозяина с целью обнаружения и сбора всех паразитических червей в имагинальной стадии; 2) метод полных гельминтологических вскрытий отдельных органов по К. И. Скрябину - позволяет установить степень инвазированности отдельных органов определенными видами паразитических червей (при диктиокаулезе тщательно исследуют трахею и бронхи, при простогонимозе - яйцевод и фабрициеву сумку птиц и т.д.); 3) метод неполных гельминтологических вскрытий - обычный патологоанатомический метод вскрытий, при котором выявляют только наиболее крупных гельминтов (аскарид, мониезий и т.д.); 4) метод парциальных гельминтологических вскрытий (по Шульцу и Шахназаровой) - предусматривает исследование (макроскопическое или с помощью лупы) только части содержимого органов вместе с гельминтами (матриксов).
Метод полного гельминтологического вскрытия по К.И. Скрябину
Метод полных гельминтологических вскрытий по К. И. Скрябину позвоночных животных проводится с учетом анатомических особенностей у вскрываемых объектов (наличие многокамерного желудка у жвачных, фабрициева сумка и воздухоносные мешки у птиц и т.п.). Перед вскрытием тщательно осматривают наружные покровы тела (могут быть членистоногие). Затем снимают кожу (просмотр подкожной клетчатки), вскрывают брюшную и грудную полости, после чего извлекают отдельные системы органов и помещают в соответствующую посуду (тазы, ведра, кюветы). После извлечения внутренних органов осматривают грудную и брюшную полости, собирают отдельно кровь, извлекают головной и спинной мозг, вылущивают глаза, исследуют полости носа и рта (делают соскобы). Тщательно обследуют синовиальные полости суставов и отдельные группы мышц (на трихинеллез). После этого приступают к вскрытию отдельных органов методом последовательного промывания («мокрым путем») и компрессорным методом («сухим путем»).
Исследование отдельных органов методом последовательного промывания требует большого количества воды и посуды (ведер, тазов и др.). Этим методом всегда исследуют органы пищеварительного аппарата, печень и легкие сельскохозяйственных животных, взрослых птиц путем многократного промывания водой их полостей с последующим просмотром матриксов поочередно на черном и белом фоне.
Исследование органов и тканей компрессорным методом применяют реже предыдущего метода. Он заключается в нарастающем раздавливании мелкого органа, или его отдельной части, или соскоба со слизистой оболочки кишечника между компрессорными или другими стеклами до прозрачности. Приготовленный таким образом препарат просматривают под лупой или под малым увеличением микроскопа. Обнаруженных гельминтов осторожно извлекают после разъединения стеклянных пластинок. Используют при гельминтологических вскрытиях цыплят, утят, гусят, моллюсков и других мелких животных. Иногда при вскрытии животных эти методы целесообразно комбинировать.
Органы пищеварения осторожно изолируют и кладут в отдельные кюветы пищевод, желудок (отдельно преджелудки у жвачных), тонкие кишки, толстые кишки, печень и поджелудочную железу. После разделения органов приступают к их вскрытию.
Пищевод разрезают ножницами по всей длине, осматривают на наличие опухолей и гельминтов. Затем предметным стеклом или прямым скальпелем делают соскоб со слизистой оболочки и исследуют его между двумя стеклами «сухим способом».
Желудок вскрывают по большой кривизне; содержимое его помещают в цилиндр. Опорожненный желудок смывают водой в этот же сосуд, доливают водой, размешивают деревянной палкой и оставляют в покое на 10-15 минут. Со слизистой желудка берут соскоб и исследуют компрессорным методом. После отстаивания верхний слой жидкости осторожно сливают (чтобы не выбросить паразитов), а сосуд с осадком вновь наполняют водой, размешивают содержимое и опять отстаивают. Периодическое промывание осадка в цилиндре повторяют до просветления жидкости. После очередного сливания жидкости (последнего) осадок просматривают макроскопически и под лупой.
У птиц два желудка: железистый и мышечный. Вскрытый железистый желудок ополаскивают в кювете (для последовательного промывания в дальнейшем). Расправленный желудок рассматривают против источника света. В железах можно обнаружить округлых самок тетрамер красного цвета. На границе мышечного и железистого желудков нередко находят узлы, заключающие в себе нематод (эхинурий). Со стороны серозной оболочки железистого желудка уток иногда обнаруживают утолщения величиной до грецкого ореха, в которых находятся нематоды (гистрихи), у которых головной и хвостовой концы выдвинуты в просвет желудка. Мышечный желудок разрезают ножницами вдоль одной из его боковых сторон, развертывают его, ополаскивают в кювете. Содержимое желудка исследуют методом последовательного промывания. Затем отделяют кутикулу от слизистой оболочки, где часто обнаруживают у водоплавающих птиц стрептокар и амидостом. Иногда внутреннюю оболочку кутикулы исследуют под лупой.
Тонкие и толстые кишки вскрывают отдельно в кюветах с водой. Вначале тонкие кишки освобождают от брыжейки (расправляют) и жира. Затем разрезают по стороне, противоположной прикреплению брыжейки. Содержимое кишечника помещают в один цилиндр, а глубокий соскоб со всей слизистой оболочки - в другой цилиндр и после промывания (до просветления) осадок исследуют макроскопически и под лупой. Таким же образом вскрывают и толстые кишки. У птиц следует вскрывать отдельно 12-перстную кишку от тонких кишок и прямую кишку от слепых кишок с целью обнаружения цестод и трематод некоторых видов, приспособившихся к паразитированию в этих органах.
Печень кладут в эмалированную кювету белого цвета, отделяют желчный пузырь, который помещают в отдельную небольшую посуду, где его разрезают и заливают водой и несколько раз промывают. Печень в сосуде с водой значале разрезают ножницами по ходу желчных ходов, затем разрывают руками на мелкие кусочки, доливают в сосуд воды. Дальнейшее исследование измельченного содержимого проводят методом последовательного промывания. После этого осадок просматривают.
Поджелудочную железу исследуют методом последовательного промывания после предварительного измельчения руками.
Органы дыхания. Гортань, трахею, бронхи разрезают и осматривают; делают соскобы со слизистой, исследуют компрессорным способом. Паренхиму легких заливают водой, раздробляют на мелкие части и исследуют методом последовательного промывания. Для пораженных участков (осевших на дно) также применяют компрессорный метод.
Половые органы исследуют методом соскоба, последовательного промывания и компрессорно.
Мочевые органы. В почках макроскопически осматривают почечную лоханку (после предварительного разреза), а паренхиму исследуют компрессорным способом под лупой. Мочевой пузырь и мочеточники вскрывают, осматривают; со слизистой оболочки делают глубокий соскоб. Мочу исследуют методом последовательного промывания.
Глаза вскрывают, просматривают внутренние сферы, веки конъюнктивальный мешок и исследуют методом последовательного промывания.
Мозг (головной и спинной) разрезают на ломтики и исследуют компрессорным методом под лупой.
Сердце и крупные кровеносные сосуды вскрывают в физиологическом растворе и исследуют методом последовательного промывания, контролируя осадок на черном и белом фоне, с последующим проведением через лупу.
Содержимое брюшной и грудной полостей можно исследовать также методом последовательного промывания.
Сбор, консервирование, этикетирование и пересылка гельминтов
Обнаруженных паразитических червей в органе или его содержимом извлекают препаровальной иглой, кисточкой (крупных паразитов - пинцетом) и переносят в отдельные пробирки с консервирующей жидкостью; нематод сразу помещают в жидкость Барбагалло (3%-ный раствор формалина на физиологическом растворе), а трематод, цестод и скребней вначале помещают в воду, где они погибают, затем прессуют и переносят в пробирки с 70°-ным спиртом. Цистицерков, ценуров, эхинококков консервируют в жидкости Барбагалло. Внутрь каждой пробирки кладут бумажную этикетку, где простым карандашом или тушью отмечают вид и пол животного (от которого собраны гельминты), номер вскрытия (как это записано в журнале вскрытия), орган, где обнаружены гельминты, какие паразиты и их число; на обороте этикетки отмечают место, где произведено вскрытие, дату вскрытия и фамилию вскрывавшего. Результаты полных и неполных гельминтологических вскрытий регистрируют в специальном журнале.
Собранный, законсервированный и заэтикетированный гельминтологический материал необходимо предохранить от высыхания. Для этого пробирки с гельминтами помещают в банку с притертой пробкой или навинчивающейся пластмассовой крышкой. На дно банки настилают вату, затем устанавливают вертикально два-три яруса пробирок и заливают жидкостью, которая находится в пробирках. Незаполненное пробирками пространство плотно тампонируют ватой. При транспортировке (с нарочным) банку снаружи обкладывают упаковочным материалом (ватой, стружками).
При сборе небольшого количества гельминтов их можно помещать в небольшие флаконы (из-под пенициллина), а также в баночки с навинчивающейся крышкой, которые перед закупоркой заливают консервирующей жидкостью. Иногда собранный материал посылают в хорошо упакованном виде почтовой посылкой.
Собранные во время гельминтологических вскрытий гельминты определяют до вида после предварительного их просветления и окраски. Просветляют нематод, акантоцефал, а также сколексы (головки) цестод в молочной кислоте, 50%-ном глицерине или смеси равных частей молочной кислоты и глицерина, для чего готовят временные препараты. Сложнее определять трематод и цестод ввиду необходимости их окраски и приготовления из них постоянных препаратов. Для окраски этих гельминтов предложено значительное число красок и методов. В практических условиях чаще используют квасцовый кармин.