Элективные среды для выделения кишечной палочки

Глюкозо-пептонная среда (Эйкмана) (ГПС)

Глюкозо-пептонная среда готовится в двух модификациях: концентрированная и разведенная. Концентрированная глюкозо-пептонная среда. К 1 л водопроводной воды прибавляют 100 г пептона, 100 г глюкозы и 50 г хлористого натрия. Сначала в воде растворяют пептон и соль, кипятят, фильтруют и, добавив в фильтрат глюкозу, устанавливают pH 7,4. Если необходимо, среду подщелачивают. После установления pH среду кипятят; если образовался осадок, фильтруют.

Концентрированную среду разливают в бродильные сосуды 1 и пробирки с поплавками с таким расчетом, чтобы при посеве среда разбавлялась посевным материалом в 10 раз. Для посева 100 мл воды нужно в бродильный сосуд поместить 10 мл ГПС, а в пробирки для посева 10 мл воды вливают по 1 мл ГПС. Стерилизация концентрированной глюкозо-пептонной среды осуществляется в кипятильнике Коха по 30 мин в течение трех дней.

В практической работе для сокращения срока стерилизации глюкозо-пептонной среды можно рекомендовать следующий режим. Температуру автоклава вначале доводят до 120°С и стерилизуют среду при этой температуре 5 мин. Постепенно снижают давление в автоклаве, выпуская пар и прекратив нагрев, до 0 ат (что соответствует температуре 100 °С) и при 100 °С (при открытом паровыпускном клапане) выдерживают среду еще 15 мин.

Разведенная глюкозо-пептонная среда содержит в 10 раз меньше всех плотных ингредиентов, чем концентрированная. Это достигается прибавлением к одной части концентрированной среды девяти частей воды. Разведенную глюкозо-пептонную среду разливают в пробирки с поплавками по 9 мл. Стерилизуют так же, как и основную среду. Используют разведенную глюкозо-пептонную среду при посеве малых количеств воды или ее разведений.

Среда Булира

При санитарной оценке воды и молока для определения в них коли-титра вместо ГПС можно применять среду Булира в разведенном и концентрированном виде.

Концентрированная среда Булира - основной раствор. Используется она в тех случаях, когда для посева берут 10 мл воды и более. К 1 л мясопептонного бульона добавляют 2,5 г маннита и после растворения устанавливают pH 6,8-7,0. Кипятят среду 10 мин, затем в горячий раствор добавляют насыщенный водный раствор нейтральрота до появления ясной вишнево-красной окраски. Среду фильтруют и разливают в бродильные сосуды и пробирки с поплавками с таким расчетом, чтобы при посеве среда разбавлялась посевным материалом в 3 раза. Обычно среды в бродильный сосуд наливают в 2 раза меньше, чем вносится посевного материала, т.е. для посева 10 мл воды в бродильный сосуд наливают 5 мл среды, для посева 100 мл воды нужно налить 50 мл среды и пр. Стерилизация среды Булира проводится в кипятильнике Коха по 30 мин в течение трех дней. Можно стерилизовать ее и в автоклаве при 120 °С в течение 15 мин.

При исследовании молока, а также при анализе воды, когда для посева берут небольшие количества продукта, готовят разведенную среду Булира: к одной части концентрированной среды приливают две части воды. Разведенную среду Булира разливают в пробирки с поплавками по 6-7 мл. Стерилизуют, как указано выше. Среда ГПС и среда Булира являются средами накопления.

Среда Кеслера

Среда Кеслера применяется для определения коли-титра в молоке и других молочных продуктах. К 1 л водопроводной воды добавляют 10 г пептона и 50 мл бычьей желчи. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании в течение 20-30 мин, фильтруют ее через вату и в фильтрате растворяют 10 г лактозы. Объем доводят до 1 л. pH среды устанавливают 7,4-7,6, добавляют 2-4 мл 1%-ного раствора (водного) генцианвиолета на 1 л среды. В пробирки с поплавками разливают по 5 мл среды и стерилизуют 15 мин при 120 °С.