Трихотецин
Трихотецин - антибиотик с широким противогрибным и антивирусным действием - образуется одним из штаммов микроскопического гриба Trichothecium roseum, широко распространенного в природе. Антибиотик принадлежит к группе соединений, содержащих в своем составе несколько о-гетероциклов, имеет эмпирическую формулу С19Н24О5. Его структурная формула может быть представлена в следующем виде.
Трихотецин - кристаллическое вещество с точкой плавления 118 °С, молекулярная масса 332. Он представляет собой сложный эфир изокротоновой кислоты и непредельного спирта трихотеколона. Антибиотик устойчив к температурным воздействиям и кислотности среды, в воде слаборастворим.
Препарат, выпускаемый промышленностью (10%-ный смачивающийся порошок трихотецина), представляет собой однородный порошок кремового цвета, содержит 10% трихотецина, 87% каолина и 3% эмульгатора ОП-7. Основные требования, предъявляемые к трихоцетину, изложены ниже.
Биосинтез трихотецина осуществляется культурой Tr. roseum L. При многостадийном получении посевного материала (маточные и посевные колбы, посевной аппарат) используется один и тот же состав питательной среды (в %): сахар-песок - 1,0 кукурузный экстракт - 1,0, аммоний сернокислый - 0,12, калий фосфорнокислый двухзамещенный - 0,1. После стерилизации pH питательной среды должен быть 5,0-5,2. Выращивание культуры в колбах в первую и вторую генерации проводится при температуре 24-26 °С в течение 36-48 ч.
Мицелиальная масса из колб в количестве 1-3% от объема среды используется для засева посевного аппарата. Процесс выращивания культуры в нем производится при непрерывном перемешивании и аэрации 1 л/(л-мин). Готовый посевной материал в количестве 8-10% от объема питательной среды используется для засева среды в основном ферментаторе.
Для производственного культивирования готовят среду следующего состава (в %): мука кукурузная 1, глицерин 1, КН2РO4 (или К2НРО4) 0,24, KNO3 (или (NH4)2SO4) 0,06, СаСO3 и MgCl2 по 0,02, жир кашалотовый 0,1. Соляной кислотой доводят pH среды до 5,3-5,6.
Культивирование проводится при 24-26 °С в течение 64-90 ч при непрерывном перемешивании и аэрации [1 л/(л-мин)]. К концу процесса выращивания содержание сахара уменьшается до 0,1-0,2%, pH среды находится в пределах 6,4-6,8, активность антибиотика составляем 300-380 мкг/мл.
После фильтрации культуральной жидкости трихотецин извлекается из нативного раствора экстракцией хлороформом, расход которого составляет 4% от объема нативного раствора. Выход трихотецина на стадии экстракции 84-85% от содержания его в культуральной жидкости. Экстракт трихотецина упаривают под вакуумом, смешивают с этиловым спиртом из расчета 10 л спирта на 1 кг трихотецина и направляют на приготовление пасты. Для приготовления трихотециновой пасты на 1 кг спиртового концентрата добавляют 0,6 кг эмульгатора ОП-7 и 8,5 кг каолина и тщательно перемешивают. Сушка пасты проводится в калориферной сушилке при температуре 65-70 °С. Готовый продукт фасуется по 2-5 кг в 4-слойные бумажные мешки с полиэтиленовыми вкладышами.
Общий выход трихотецина от его содержания в культуральной жидкости составляет 70%.